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      血清那些事兒

      發布時間:2018-03-07      點擊次數:1116
       血清小知識
      血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,而且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。
      胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品質zui高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分zui少。
       
      保存血清的方法
      長期保存的血清必須儲存于-20℃或-80℃低溫冰箱中,由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。多數情況下一瓶500ml的血清不能夠一次使用完畢,所以建議一次性將血清分裝成一次性能夠使用完畢的體積(如50ml)。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。
       
      如何解凍血清
      我們建議血清在2-8℃的冰箱過夜溶解,在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。瓶裝血清解凍應采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天;然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
       
      血清中如果出現沉淀
      血清中沉淀物的出現有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
      若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。不要以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
       
      血清的熱滅活
      加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養胚胎干細胞(ES)細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
      熱滅活一般是56℃、30分鐘加熱已完全解凍的血清,加熱過程中須規則搖晃均勻。
      除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多。
       
      有必要對血清都進行熱滅活嗎?
      實驗顯示,熱滅活血清對大多數的細胞而言是不需要的。經過處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至可能因為高溫處理影響了血清的質量,造成細胞生長速率的降低。經過熱處理的血清,沉淀物會顯著地增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此若非必須,無需對血清進行熱滅活處理。
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