預制膠常見問題指南
發布時間：2018-03-15 點擊次數：4115
注意事項 ★一定要使用我們盒內配套的電泳緩沖液； ★上樣量和濃度不能過高。
1.我們的預制膠與哪些品牌電泳槽兼容？
| ● Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；
● Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)；
● Life Technology (Invitrogen)；
● Novex Mini-Cell； | ● Mini Gel Tank (A25977) (請與EZbiolab 特制擋板配合使用)；
● 北京六一 DYCZ-25E；
● 君意東方 JY-SCZ2+；
● 天能 VE180。 |
2.Running buffer粉末如何溶解？ 電泳前，將running buffer 粉末用ddH2O溶解至500ml即可。
3.變性膠和非變性膠的區別？
變性膠與非變性的凝膠成分是一樣的，均不含SDS。兩者的*區別在于變性膠的running buffer中含SDS, 而非變性膠的running buffer不含SDS。
4.不同緩沖體系，蛋白遷移率不同？
Q1：為什么蛋白表達出來了，SDS-PAGE檢測時大小不符？
A1：進行SDS-PAGE檢測的時候蛋白的凈電荷會影響遷移率。帶電量高的蛋白會結合較少的SDS，因此阻礙了蛋白泳動。富含脯氨酸的蛋白會在SDS-PAGE膠中移動得特別慢。但是如果蛋白的等電點在5-9之間，并且組成的氨基酸組分沒有明顯的偏好，那么目的蛋白遷移率與預期相差較遠就很有可能不是由于凝膠電泳造成的。這個時候利用C-端或者N-端的標簽進行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而導致多條目的條帶或者比預期小很多的條帶出現。如果蛋白酶過高可以嘗試換個缺陷菌株。
5.剝膠困難怎么辦?
*步: 用小刀劃開側邊的膠即可打開玻璃板
第二步：順著紅色的線用小刀輕輕劃一下
6.預染marker沒有跑出來條帶？
原因很可能是客戶沒有用我們的Hepes running buffer 來跑膠，而是用了如 tris-glycine等其他running buffer。
我們做過對比實驗，結果如下圖所示：
7.1.5mm的預制膠，您推薦的染色時間是幾分鐘合適？
微波爐加熱至少90℃，置于搖床上染色30min。
8.條帶跑斜或跑成點狀的原因是什么？
條帶跑斜和蛋白的濃度有關，不同的蛋白遷移速度， 不會有什么影響， zui終跑膠結果的條帶還是平的。
跑成點狀的原因是：
1、蛋白樣品的總濃度過高，適當降低濃度。 2、樣品沒有處理充分 3、 沒有吹打上樣孔， 樣品沒有沉到膠孔底部。
9.尿素膠與TBE膠分離范圍是哪些呢？
| 尿素核酸預制膠分離范圍： | TBE核酸預制膠分離范圍： |
5% 50–1000 nt
10% 35–300 nt
15% 10–50 nt | 5% 200 bp–2 kb
10% 50 bp–1.5 kb
15% 20 bp–1 kb |
尿素膠跑的是單鏈的核酸分子，所以單位是一個核苷酸 Nucleotide，簡稱nt。TBE膠跑的是雙鏈核酸分子，所以單位是堿基對base pair，簡稱bp。
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