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      Forskolin的功能與作用

      發布時間:2018-04-10      點擊次數:7117
        Forskolin在不與細胞表面受體相互作用前提下刺激腺苷酸環化酶活性。在脂肪細胞中Forskolin's促進 cAMP產生進而可以抑制嗜堿性粒細胞和肥大細胞脫顆粒作用以及組胺釋放,降低血壓、眼內壓,抑制血小板聚集,促進血管舒張,支氣管擴張和甲狀腺激素分泌,刺激脂肪分解。Forskolin 抑制血小板活化因子 (PAF)的結合, 這種抑制不依賴于cAMP形成可能是 Forskolin直接作用于 PAF或者通過干擾PAF與它的受體結合實現的,似乎對多種膜轉運蛋白也有效果并且可以抑制脂肪細胞,紅細胞,血小板,和其他細胞中的葡萄糖運輸。Forskolin也被用于治療青光眼
       
        Forskolin可以使膜,細胞或組織制備液中cAMP含量上升。Forskolin 不僅可以活化AC 而且可以與某些其它蛋白相互作用,包括葡萄糖轉運蛋白和離子通道。Forskolin能夠促進9種不同獨立AC形式的活化,雖然對AC9效率有點低,這可以用于提供一種鑒定和量化G蛋白 (Gs)–AC復合物高親和性結合位點的方法。G蛋白偶聯受體活化G蛋白有助于細胞中Forskolin刺激的cAMP 產生,因為 G蛋白-Forskolin對AC活性有增強作用。
       
        Forskolin的細胞內濃度由兩個細胞膜上的酶調節,促進 ATP 合成 cAMP, 而磷酸二酯酶把 cAMP 降解成 AMP。cAMP 的激活是由不同的 GTP 結合蛋白偶聯受體受體(GPCR)和 GTP 結合蛋白(Gs 或者 Gi)相互 作用而調節。蛋白是由 Gα (i 或者 s) 、Gβ 和 Gr 組成的異源三聚體GPCR 激動劑使 GTP 和 Gα 結合,產生構象變化,導致 Gα 與 Gβ γ 分離.分離后,Gα s 主要與 AC 激活有關,而 G α i 則是抑制 AC 活性。測量胞內 cAMP 是檢測化合物對 GPCR 介導的 AC 活性的激活或者抑 制作用的理想方法。細胞制備,細胞長到 70%的時候, 用不含鈣和鎂離子的 PBS 洗一次, 然后用 5mM EDTA(PBS 配制成的)37 度消化 5min,275g 離心 10min.HBSS 1X 重懸,計數,275g 離心 5min.用 stimulation buffer 重懸細胞,按 6*105 個/ml 的濃度稀釋細胞(3000/孔) 分析步驟 1 Gα s 受體分析 cAMP 標曲 Gα i 受體分析 cAMP 標曲 目的 確定 cAMP 分析的敏感性 (IC50 值)和動態范圍 (IC10-IC90) 。確定zui大分析窗的*細胞 濃度,對于 Gα i 分析,確定 Forskolin 的 EC90 以用于激動 劑分析。
       
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