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      如何利用牛血清白蛋白測定蛋白濃度?

      發布時間:2019-08-19      點擊次數:2400
       
        牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用,一般作為穩定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,穩定酶活性,并可防止酶的分解和非特異性吸附;ELISA、WB中也常常用到,比如封閉液,樣本稀釋液,酶結合物稀釋液都可以用BSA;蛋白定量時作為標準物;酶活測定反應中作為陰性對照;血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用,在動物細胞無血清培養中,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。
        BSA一般做為穩定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,因為有些酶在低濃度下不穩定或活性低。加入BSA后,它可能起到“保護”或“載體”作用,不少酶類添加BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什么影響。對多數底物DNA而言,BSA可以使酶切更完全,并可實現重復切割。在37℃,酶切反應超過1h時,BSA可以使酶更加穩定,因為在不含BSA的反應緩沖液中,許多限制性內切酶在37℃下只能存活10~20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內切酶活性的金屬離子和其它化學物質。
        測定蛋白濃度
        按50:1配置工作液。10ul蛋白標準液+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ul工作液,室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度,依標準曲線算出蛋白濃度。
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