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      珍貴細胞污染防不勝防?即使亡羊也需補牢

      發布時間:2020-03-26      點擊次數:703

      各位老師們培養細胞時想必頭疼的就是各種污染問題,尤其是一些珍貴細胞,發現污染后更是欲哭無淚,有時候出現污染但是沒有留心則會影響整個實驗進度,所以小愛為大家掙了一下細胞培養出現的問題和處理方法,爭取讓老師們少走些彎路。
       

      一、黑膠蟲污染

         因為小愛近期收到客戶反饋實驗細胞被黑膠蟲污染導致實驗無法進行,所以這邊首先解一下黑膠蟲污染,黑膠蟲屬于一種爭議生物,有人認為是從血清中來的一種原蟲,也有人認為是細菌,或是真菌,也有人認為是血清中的蛋白的結晶。"黑膠蟲"可寄生于動物細胞,也可以生存于中,依靠細胞和培養基中的營養為生,并隨細胞傳代而傳代。"黑膠蟲"與細胞競爭性生長,開始時對細胞并沒有什么影響,但當黑膠蟲的數量多到一定程度的時候, 細胞生長就會受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動的開展和進行。老師們如果遇到培養基中被黑膠蟲污染可以選擇專門的除黑膠蟲培養基來改善。


      二、細菌污染

        細菌污染是常見的細胞污染,一旦實驗環境殺菌處理不當,很大概率會引起細胞污染,根據污染的細菌形態不同,細菌污染后顯微鏡下觀察結果也不同,其次,培養液發黃,變渾濁,可明顯看見培養皿中有細沙狀的沉淀物,時不時還有異樣氣味發出,如下圖所示,可以在培養基中加入抗生素處理,可以用四環素,慶大霉素,或者鏈霉素,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是,細胞自身可能會收到影響,因此預防污染是首要。

       

      (圖片轉自生物女學霸)

      三、真菌污染

          真菌污染的培養基在早期不易觀察,到中期出現絲狀或絮狀物時培養基已經污染嚴重,細胞基本已經死亡,發現后應立即將培養基處理掉,操作臺紫外殺菌消毒,培養皿以及相關耗材放入高壓蒸汽鍋中滅菌處理。(霉菌同真菌一樣)


      四、支原體感染

      培養液變渾濁,支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是細胞狀態變差、生長變慢,在顯微鏡下觀察可能會有小黑點,但培養基一般不發生渾濁。細胞傳代以后就出現細胞間黑點,細胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細胞,終細胞漂浮,完全死亡。此時切斷源頭為關鍵,實驗室進行全面滅菌處理,并換用支原體清除培養基進行實驗。
       

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