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      細胞培養相關——營養物質

      發布時間:2021-04-09      點擊次數:829

      細胞培養(cell culture)是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。

       
      動物細胞培養

      動物細胞培養(animal cell culture)就是從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞(使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養基中,讓這些細胞生長和增殖。

      將動物各種組織從機體中取出,經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA) 或機械方法處理,分散成單細胞,在合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖,這一過程稱原代培養。當細胞在培養瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,細胞才能繼續生長,這一過程就叫傳代。


      植物細胞培養

      植物細胞培養是在離體條件下,將愈傷組織或其他易分散的組織置于 液體培養基中進行震蕩培養,得到分散成游離 的懸浮細胞,通過繼代培養使 細胞增殖,從而獲得大量細胞群體。


      微生物細胞培養

      微生物培養所培養的微生物通常是病菌、細菌、放線菌、真菌等。微生物多為單細胞生物,野生生存條件比較簡單。所以微生物人工培養的條件比動植物細胞簡單得多。其中厭氧微生物培養比好氧微生物復雜,因為嚴格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度,而好氧微生物則只需要通過不斷攪拌提供無菌氧氣。微生物對培養條件要求不如動植物細胞那樣苛刻,玉米漿、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏等成為良好的微生物天然培養基。


      培養條件

      1. 無菌、無毒的環境:對培養液和所有培養用具進行無菌處理,通常還要在培養液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外應定期更換培養液,以便清除代謝產物防止細胞代謝產物累積對細胞自身產生危害。
      2. 營養物質:無機物(無機鹽、微量元素等),有機物(糖、氨基酸、促生長因子等)
      3. 血清和血漿 (提供細胞生長必須的營養成份)
      4. 溫度和pH(5±0.5℃,7.2~7.4)
      5. 氣體環境(95%的空氣+5%CO?的混合氣體)

       
      離體培養細胞與體內細胞在營養要求上的主要差別:
      ·體外長期培養的細胞大多需要血漿、血清或胚胎浸出液。
      ·在體內血液中許多活性很強的物質只需微量即可維持營養的需要,而在體外培養時無法觀測,量多了可能與微量的作用不同,量少了又可能很快就被消耗掉。
      ·培養細胞是一群離體細胞,而這些細胞有不同的營養要求。這些不同的營養要求在體內由其他器官和組織細胞的活動間接供給,而在培養基中則沒有這種供給,也不受其他組織代謝的影響。
      ·各種組織都有其特殊的營養要求,能適合某一種組織的培養基,不一定就能適合別一種組織的細胞,其差異有時較大。
      ·在體內的細胞,其新生與衰亡維持一種平衡,而在體外培養時,細胞增殖,體積加大,增殖速度往往高于分化速度,新生細胞比衰亡細胞生長要快,所以營養要求更高。


      由此可見,各種不同的細胞具有不同的營養要求。因此,細胞營養的研究在組織細胞培養中非常重要。凡能進入細胞中被細胞所利用,參與細胞代謝活動和維持細胞生存的物質均屬營養物質。體外培養細胞的生長所需的基本營養物質,除糖類、氨基酸和脂類三大類營養物質外,也需要一定量的無機鹽、維生素和微量元素等。為防止污染,培養基中還需添加一定量的抗生素。

       
      細胞培養中的營養物質

      一切營養物質只有溶于水,才易被細胞吸收。代謝產物也需溶于水才能排泄。水還便于溶質物質的轉移。水作為一種導熱體,對生物體內環境溫度的調節起重要作用。水中有溶解氧的存在,可供細胞呼吸,可維持水中有機體的生存。細胞培養用水必須經過2~3次玻璃器皿蒸鎦或者用離子交換樹脂處理。這樣的水含雜質少、純度高,應用起來安全可靠。

      細胞靠糖的氧化來獲得能量。葡萄糖是機體活動能量的主要來源。故在培養基中應加入一定濃度的葡萄糖( 1g/100ml),以在生物氧化后供給細胞大量的能量。近年證明谷氨酰胺也是碳的重要來源.葡萄糖的作用與平均細胞容積有直接的關系,而與細胞數的變化關系較小。很多健康胚胎細胞和成體細胞,皆依賴無氧酵解來獲得能量,有些細胞也可以經脫氨獲得基本能量。

      • 氨基酸

      氨基酸是組成蛋白質的基本單位。所有培養細胞需要以下12種基本氨基酸:
      精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、胱氨酸及酪氨酸。另外尚須谷氨酰胺。

      • 維生素

      維生素是人類及動物細胞維持生命和生長所需的一種活性物質。許多維生素是酶的輔酶和輔基的組成部分,對細胞的代謝有重大的影響,某些維生素缺乏,短期可引起細胞死亡。

      • 無機離子和微量元素

      鈉、鉀、鎂、鈣、磷、氮等無機離子是細胞生長所必需的,它們參與細胞的代謝,是細胞組成所需要的。此外,微量元素鐵、鋅、硒等也是細胞生長需要的。細胞培養時用的平衡鹽溶液主要含鈉、鉀、鈣、鎂等陽離子。

      • 血清

      血清中含有多種促進細胞生長因子,是體外培養細胞所需生長因子的重要來源。

      • 促細胞生長因子

      體外培養細胞除需要上述營養成分外,同樣需要促進細胞生長的激素類物質,尤其是促細胞生長因子。如胰島素能促使細胞利用葡萄糖和氨基酸,有促進有絲分裂作用,對很多細胞的增殖生長均有促進作用。氫化可的song對皮膚上皮細胞及乳腺上皮細胞增殖生長有很好的促進作用,還能提高神經膠質細胞和成纖維細胞的克隆形成率。

       
      細胞培養的應用

      1. 直接觀察活細胞的形態結構和生命活動。用于細胞學、遺傳學、免疫學、實驗醫學和腫瘤學等多種學科研究.
      2. 直接觀察細胞的變化可便于攝影。
      3. 研究細胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。
      4. 便于使用各種技術:相差、熒光、電鏡、組化、同位素標記等方法觀察和研究細胞狀況。
      5. 是分子生物學和基因工程學的研究對象,也是其主要的組成部分。
      6. 易于施用物理、化學生物的實驗研究。
      7. 易于提供大量生物性狀相似的實驗對象,耗資少比較經濟。
      8. 成為生物制品單克隆抗體生產和基因工程等的材料來源。


      營養物質:

      貨號名稱規格
      abs9379腦心浸液瓊脂(BHI)250g
      abs9378腦心浸液肉湯250g
      abs47014866酵母膏500g
      abs47014867胰蛋白胨500g
      abs42219719瓊脂粉500g
      abs47050765葡萄糖5kg
      abs42013254磷酸氫二銨100g/500g


      氨基酸:

      貨號名稱規格
      abs45126251DL-蛋氨酸100g/500g
      abs42020716L-賴氨酸100g/500g
      abs45156824L-苯丙氨酸100g/500g
      abs42152262L-色氨酸25/100g/250g
      abs45156854L-纈氨酸25/100g/500g
      abs44064065L-胱氨酸100g/500g
      abs45156847L-酪氨酸100g/500g


      維生素:

      貨號名稱規格
      abs42088615Vitamin A100mg/1g
      abs42237431Vitamin B15g/25g
      abs47001114vitamin B620mg
      abs42157283Vitamin B121g/5g
      abs42020367L-Ascorbic Acid500g
      abs42029319Vitamin D21g/5g
      abs47018967Vitamin E20mg
      abs42088618Vitamin K11g/5g
      abs42157289Vitamin K425g


      血清:

      貨號名稱規格
      abs973胎牛血清(優級),輻照125ml/500ml
      abs982BHK細胞新生牛血清(優級)125ml/500ml
      abs981BHK細胞新生牛血清(特級)125ml/500ml
      abs988CHO細胞新生牛血清(優級)125ml/500ml
      abs987CHO細胞新生牛血清(特級)125ml/500ml
      abs984Vero細胞新生牛血清(優級)125ml/500ml
      abs983Vero細胞新生牛血清(特級)125ml/500ml
      abs986二倍體細胞新生牛血清(優級)125ml/500ml
      abs985二倍體細胞新生牛血清(特級)125ml/500ml
      abs989馬血清(優級)125ml/500ml


      抗生素:

      貨號名稱規格
      abs9246青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液(100×三抗)100ml
      abs9245青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液(100×三抗)100ml
      abs9244青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗)100ml
      abs47047771Carbenicillin disodium salt25g/100g
      abs47014828Hygromycin B1g/5g/10g
      abs42083989Penicillin G sodium salt1g/25g


      消化酶:

      貨號名稱規格
      abs44071510Pancreatin50g/250g/1kg
      abs47014937Trypsin (0.25%), Phenol Red100ml
      abs47014940Trypsin, TPCK Treated100mg/500mg
      abs47014938Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red100ml
      abs47047375Trypsin-EDTA(0.25%) ,不含酚紅100ml


      其他輔助產品:

      貨號名稱規格
      abs44059881MCDB 131(不含L-谷氨酰胺)500ml
      abs42155907Poly-L-Lysine Solution100ml
      abs04429Recombinant Human Fibronectin  Fragment/NovoNectin10μg/50μg/500μg
      abs04456Recombinant Human  Serotransferrin/Transferrin (C-6His)10μg/50μg/500μg
      abs44077956Recombinant Human Transferrin100mg/1g/10g
      abs9361多聚L-賴氨酸25mg/100mg
      abs9187二甲基亞砜(DMSO)(細胞培養級)50ml
      abs9413無血清細胞凍存液(治療級)100ml
      abs9253支原體清除試劑20mg/100mg
      abs9254支原體清除試劑Plus10mg


      耗材:

      貨號名稱
      abs7009100um細胞過濾器(160目,黃色)
      abs700740um細胞過濾器(300目,紫色)
      abs700870um細胞過濾器(200目,白色)
      abs7034標準透明12孔細胞培養板
      abs7035標準透明24孔細胞培養板
      abs7040標準透明48孔細胞培養板
      abs7033標準透明6孔細胞培養板
      abs7037標準透明96孔U型底細胞培養板
      abs7036標準透明96孔細胞培養板
      abs7014175cm²細胞培養瓶(600ml,密封蓋)
      abs7015175cm²細胞培養瓶(600ml,透氣蓋)
      abs701025cm²細胞培養瓶(50ml,密封蓋)
      abs701125cm²細胞培養瓶(50ml,透氣蓋)
      abs701275cm²細胞培養瓶(250ml,密封蓋)
      abs701375cm²細胞培養瓶(250ml,透氣蓋)

       

      Absin特色產品線(全部現貨):
      WB相關:ECL發光液、預染marker、預制膠;IHC相關:二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體;定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

       

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