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      快速內切酶SpeI

      簡要描述:快速內切酶SpeI適用于經過純化的 PCR 產物酶切。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度,10&#215; Cut Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。

      • 產品型號:abs60237
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2021-12-20
      • 訪  問  量:100

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      Product Category

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      詳細介紹

      品牌自營品牌供貨周期現貨
      應用領域化工,生物產業,能源
      產品描述
      描述
      愛必信的快速內切酶是一系列經過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內精確完成DNA切割的限制性內切酶,適用于質粒DNA、PCR產物或基因組DNA等的快速酶切。愛必信的快速內切酶具有如下特點:5~15分鐘內即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應體系;良好的酶活冗余度,輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外,愛必信生物去磷酸化、連接試劑在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反應,提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
      識別位點:
      5'...A ↓ T A G T...3'
      3'...T G A T C ↑ A...5'
      同裂酶:AhlI,BcuI
      注:同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

      快速內切酶SpeI產品組分:

      名稱規格
      Spel50 μl
      10× Cut Buffer1 ml
      10× Cut Color Buffer1 ml
      使用方法

      1. 快速內切酶SpeI  DNA 快速酶切流程:
      ① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系:


      質粒 DNAPCR 產物基因組 DNA
      ddH2O15 μl16 μl30 μl
      10× Cut  Buffer 或 10× Cut  Color Buffer2 μl3 μl(a)5 μl
      底物 DNA2 μl (up to 1 μg)10 μl (~0.2 μg)10 μl (5 μg) 
      Spel1 μl1 μl5 μl
      Total20 μl30 μl50 μl
      a. 本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度,10× Cut Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,會影響酶切產物,因此如下一步需進行克隆等操作,建議酶切前對 PCR 產物進行純化。
      ② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;
      ③ 37℃溫育 15 min(質粒),或 15~30 min(PCR 產物),或 30~60 min(基因組 DNA);
      ④ 80℃溫育 20 min 即可使酶失活,停止反應(可選)。
      2. 雙酶切或多酶切:
      ① 每種快速內切酶的用量為 1 μl,并根據需要適當擴大反應體系;
      ② 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10;
      ③ 如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,在其最適反應溫度下進行酶切反應。
      3. 適用于質粒的擴大反應體系:
      DNA1 μg2 μg3μg4 μg5 μg
      Spel1 μl2μl3 μl4 μl5 μl
      10× Cut  Buffer 或 10× Cut Color Buffer2 μl2 μl3 μl4 μl5 μl
      Total20 μl20 μl30 μl40 μl50 μl
      注:如果總反應體系大于 20 μl,應適當增加溫育時間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
      不同 DNA 中的酶切位點數量:
      λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
      00000003

      甲基化修飾影響:
      DamDcmCpGEcoKIEcoBI
      無影響無影響無影響序列可能重疊
      剪切可能受影響
      序列可能重疊
      剪切可能受影響

      在不同反應緩沖液中的活性:

      Cut BufferThermo Scientific
      FastDigest Buffer
      NEB
      CutSmart®
       Buffer
      Takara
      QuickCut™ Buffer
      活性100%100%100%100%
      儲存/保存方法
      -20℃,有效期2年。
      技術指標
      建議反應條件:
      1× Cut 緩沖液;
      37℃溫育;
      參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。
      失活條件:
      80℃溫育 20 min。
      質量控制:
      功能活性檢測:
      最適反應溫度下,在 20 μl 反應體系中,1 μl SpeI 能夠在 15 min 內完全消化 1 μg pUC19-SpeI DNA。
      超長時間溫育檢測:
      最適反應溫度下,將 1 μl SpeI 與 1 μg pUC19-SpeI DNA 共同溫育 3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現星號活性。
      酶切 - 連接 - 再酶切檢測:
      最適反應溫度下,使用 1 μl SpeI 消化底物,回收酶切產物。在 22℃下使用適量 T4 DNA Ligase(Fast) 可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。
      非特異性內切酶活性檢測:
      最適反應溫度下,將 1 μl SpeI 與 1 μg 超螺旋質粒DNA 共同溫育 4 h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態。
      藍白斑檢測:
      將含有單一 lacZα 基因的載體以 1 μl SpeI 消化,重新連接后轉化入大腸桿菌感受態細胞,涂布在含有對應抗生素、IPTG和 X-gal 的 LB 培養基平板上。連接正確的產物會生長出藍色菌落,而連接錯誤(即 DNA 末端切口不完整)的產物將得到白色菌落。對于愛必信的系列限制酶而言,白色菌落比例應小于 1%。
      溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究

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